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想請問各位是否遇過類似的問題, 我將兩個等量的plasmid同時利用lipofectime2000 transfect到HEK293細胞中 但是每次都是某個plasmid的表現量很低 有時候甚至沒有表現 一開始我懷疑是不是plasmid有問題 所以重新做了maxi prep 也送了定序 都是ok的 想請各位有遇過類似的問題嗎? 或者可以給我一點建議呢? 謝謝!! -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 95.117.122.145 ※ 編輯: cdkcyclin 來自: 95.117.122.145 (04/15 00:32)
blence:single transfec應該是正常的吧,為什麼會懷疑sequence有錯? 04/15 02:39
blence:如果是因為single transfec表現量就不正常,那標題明顯誤導 04/15 02:41
blence:一般來說cotransfec有干擾很常見,連plasmid跟si一起放也會 04/15 02:46
joseph103331:正常 干擾也有可能是表現的競爭 04/15 17:26
joseph103331:看你的實驗目的是什麼 有時候量不同沒關係 有時候有 04/15 17:26
puec2:會耶 我送兩個plasmid也常常遇到一個很強另一個很弱的 04/15 20:17
puec2:如果兩個plasmid用不同promoter會好一點嗎? 04/15 20:17
a90648:會,用同一個就變成競爭啦 04/16 09:45
puec2:但是這樣一口氣要改24個plasmid...想到就懶 04/16 12:27
puec2:最神奇的是我的control不管怎麼表現 兩個plasmid的表現量 04/16 12:27
puec2:一直都很穩定 只有實驗組會有表現不平均的情形 04/16 12:27
chaunen:藥會影響protein stability? 04/16 19:14