[求救] 請教comet assay相關問題

[brume1026 (蒼之濤)]

各位好:

這是我第一次做 comet assay

我們家有買 TREVIGEN 的 kit

所以分別有做了 Alkline/Neutrl 二種

有按照他們家的 protocol 做

但我們家沒有專門跑 comet assay 的電泳槽

只能用一般跑gel的電泳槽跑

請問:

(1) 跑gel的條件是使用1x TBE,

18 V/cm,跑30分鐘

[利用外接電源供應器(MP-250V),1 V/cm,電泳槽 - → + 為18cm]

但是電流就沒像說明書上達到~220mA

這樣跑出來的是沒問題的嗎? 還是需要借專門跑comet assay的電泳槽?

(2) 請問利用這套kit做需要用蓋玻片壓嗎?(一開始將膠滴在玻片上的時候)

而且最後在37度烘箱烘乾之後,需要再做額外的處理嗎?

需要再加mounting medium在封起來嗎?

因為利用螢光顯微鏡拍照的時候很常對不到焦

請問有什麼解決的方法嗎?



請有做過的大大指導一下

感恩^^

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◆ From: 140.109.66.102
→ blence:一般電泳槽即可,可是我看到的常見的是14cm,你的還有點大
→ blence:這個kit不需蓋玻片,買來的已經coating好了,還有,別用37度
→ blence:比較好,泡EtOH後直接放有機hood烘一下很快就乾
→ blence:也不用封片,對焦不到是因為gel還是有其厚度,其中包覆cell
→ blence:所以無法在同一層,一開始放的agarose量減少比較能解決問題
→ brume1026:謝謝樓上大大的幫忙^^ 最近來試一下減少agarose的條件