[求救] transfection的步驟

[kattyhouse (kat)]

現在用的是santa cruz的transfection reagent和transfection medium
要用的是siRNA的系統

看到santa cruz的protocol有寫到

1.要用 antibiotic free的medium~
  所以是真的不能在growth medium中加任何antibiotic嗎?

  因為我家的細胞中都有加antibiotic可以直接將細胞從有antibiotic的換到沒有的嗎?

2.在transfection前，他說要用transfection medium wash過，這個步驟是有必要的嗎?
  因為在transfection 過後是直接加入transtection medium+reagent+siRNA incubate
  5-7hr
  所以~是要照protocol寫的照做? (因為有看到說transfection前最好不要換medium)

3.這樣的做法好像是transient transfection，他是可以打下來再換到我要做實驗條件嗎?


因為第一次做，所以有以上問題想請教大家~謝謝

--
※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) 
◆ From: 210.60.122.160
推 iceking:1. 可以直接換沒問題. 事實上,養細胞不需要加antibiotic
→ iceking:2. transfection medium通常是serum free,因此wash可將原
→ iceking:本的serum洗去,建議照protocol做~
→ blence:lipo2000,fugene hd, turbofect等不少家都不需要serum free
→ puec2:serum free效率比較高啦
→ puec2:沒用過santa cruz但是lipo2000就很好用了
→ puec2:Fugene HD前幾年QC不穩 後來換掉 Turbofect的毒性有點科科
→ puec2:如果要送大量plasmid要用到大量transfection reagent的時候
→ puec2:要考慮一下 現在都用TransIT 2020 超好用!
→ puec2:lipo2000我都是用來送RNA(>10K)
→ puec2:siRNA你送進去應該過幾天就失效了吧?
→ puec2:除非你送得是shRNA可以用抗生素篩選有帶plasmid的細胞