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發問時請注意,若是要問實驗相關的問題,請將實驗的步驟、所用的條件大致列出 以方便板友幫您追蹤問題 RAW264.7 細胞種在24孔盤5*10的五次方1 c.c.用LPS(200ng/ml)誘導24小時 用R&D的ELISA kit DY401做 做了很多次都幾乎測不出IL-1 Beta 看了很多paper都發現條件都差不多別人做得出來我做不出來到底是怎麼回事????? 還是有特殊的小技巧才做得出來 也有聽說IL-1Beta 分泌量本來就非常少很容易測不出來???? 誰可以救救我阿~ -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 140.120.104.158
d200190:細胞代數?Morphology還是圓形?有沒有Serum-free? 04/26 01:37
d200190:Standard是否有跑出來?跟Control比較量? 04/26 01:38
Daphnia:代數為從凍保管出來後第五代,有些有長腳,誘導時還是含血清 04/26 18:09
Daphnia:10%,standard指的是?任何處理組量都低於ELISA的偵測極限 04/26 18:11
d200190:Standard是kit內附的標準IL-1beta啊,這個有跑出來嗎? 04/27 00:21
d200190:LPS的效價可以保證嗎?濃度有沒有錯呢?是否有提高濃度作看 04/27 00:23
d200190:看? 04/27 00:23
robinduck:pro-inflammatory cytokine, 試試看早一點的時間點吧! 04/27 03:48
c1314205:LPS處理6小時 IL-1B會最大量 04/27 15:23
c1314205:24 well 一格10的五次方 500ul/well 我做的是j774a.1 04/27 15:25
c1314205:raw 也做得出來,raw是否活化了? 狀態好嗎? raw不好養, 04/27 15:26
cutilis:我印象中RAW沒有ASC,所以inflammasome不會活化耶 04/27 23:57
cutilis:用LPS最多pro-IL-1b會產生,但是要被cleaved成IL-1b需要 04/27 23:58
cutilis:inflammasome的活化,不過這是憑印象,請再確認一下 04/27 23:59
Daphnia:標準曲線有做出來! 04/29 02:22
Daphnia:所以IL–1B誘導時間6小時就可以了嗎??怎麼感覺有點短 04/29 02:24
Daphnia:所以IL–1B是短時間就會大量分泌嗎?我看一些paper都誘導2 04/29 02:28
Daphnia:4小時也!? 04/29 02:29
hielin:RAW cell沒有ASC喔 所以即便有LPS刺激 IL-1 beta 還是無法 05/01 23:10
hielin:secrete出細胞外喔 05/01 23:11
c1314205:不好意思,經過討論,大家都不建議RAW測IL-1B 抱歉 囧 05/04 17:24
jasonstudio:LPS 24小時做得出來哦 但是濃度不高哦 200pg/ml左右 05/11 01:55