→ saviora:那有Positive control嘛 04/30 16:06
推 vancent:先去看expire date吧= = 04/30 16:08
→ genep:時間點是? 04/30 23:50
推 hsuwenli:這邊是A431 cell,3小時刺激就有反應 05/10 18:35
→ hsuwenli:磷酸化的反應 05/10 18:35
→ hsuwenli:25ng/ml 05/10 18:36
已有先爬過文, 如果還是有重複自删
最近再補EGF-stimulation的實驗
但已經做了好幾次,每次跑wb的結果都壓不出P-EGFR
照理來講, treat EGF 之後, EGFR磷酸化的部分應該是不會這麼難壓
而且以前做過一兩次也都沒有問題...
最近重複幾次,也換了一管分裝的STOCK就是壓不出來
我們家的EGF stock配好之後,分裝冰再-20℃,
有需要用的時候再拿到冰上回溫, 做實驗的時候也是一直插在冰上,
以確保他不會壞掉
我實在是不知道問題出在哪裡....現在有打算再換一管stock試試看
但是又怕是不是我做實驗的過程有問題
所以想請問各位要做EGF stimulation相關實驗的時候, 是怎麼做的
我的protocal如下:
seeding cell(通常我會seeding 5*10^5 in 60mm culture dish)--->
隔天先用serum-free的DMEM starvation 30mins
之後treat 10ng/ml EGF
開始收時間點
謝謝大家看(問題實在是有點長...
也麻煩大家了>"<
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◆ From: 140.116.93.172
※ 編輯: fall199721 來自: 140.116.93.172 (04/30 16:00)