[求救] RNA品質品質差可以繼續作RT嗎？

[xlg01 (異三構體蛋白質)]

目前抽RNA的目的是要上Q-PCR看基因表現
處理程序為2-STEP 大致如下

1.抽RNA，定量
2.取定量RNA，逆轉錄合成cDNA
3.cDNA定量，取一定量cDNA上Q-PCR

我RNA抽壞了 也有抓了出錯原因
260/280約為1.6～1.9 應有genomicDNA污染
因為材料得來不易所以捨不得丟

而我的想法是逆轉錄的過程中也會使用有DNAse的酵素處理
且合成完之後還是會定量ssDNA的量再上機
所以我認為這樣RNA應該還是可以用
想請問版大們的意見與指教！





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◆ From: 118.168.68.50
推 aceliang:1. 如何定量ssDNA?
→ aceliang:2. 既然有gDNA污染，那你怎麼取定量RNA?
→ aceliang:3. 假設cDNA可定量，又另取上qPCR，那何苦定量RNA做RT?
→ aceliang:4. Real-time的話是RQ，定量誤差有一定的空間。
→ BGG:RT 過程中有DNase 那你轉出來的 DNA 還會在嗎!!!!
→ huuban:有smear就不能做Real-time，沒有smear還勉強可以
→ huuban:應該是先DNase處理>>純化>>然後反轉錄，這樣比較保險/  \
推 mesenchymal:如果真的是genomic DNA的關係,然後你primer 是跨exon
→ mesenchymal:那樣倒是可以試試
→ untilnow:DNASE處理－＞純化 －＞反轉錄 這樣做最穩
→ untilnow:多半天工 省的你日後好幾天想東想西
→ hsuwenli:genomicDNA質也是260/280
推 puec2:你qPCR的primer沒有設計跨intron嗎？