[求救] RE digestion

[ai760721 (蜜汁排骨飯)]

各位前輩好

最近在cloning的時候出現很詭異的問題

我所使用的是pEGFP-C3的plasmid

因為實驗需求

須把EGFP部分以AgeI跟BglII切下

然後用klenow切平在self-ligation

但是詭異的事情出現了

我用酵素作用完跑膠然後把上面的Band切下做klenow(此時確定EGFP的band有切出來,

有看到清楚EGFP的band)

然後self-ligation, transformation, mini-culture後

想說用ApaLI跟EcoRI確認一下，去掉EGFP之後應該會得到一個約1Kb的band

沒想到竟然出現1.7K左右的Band

這不就是EGFP又長出來了ㄚㄚㄚㄚㄚ

至此實在是百思不得其解....

有沒有哪位前輩有這樣的經驗可以指點一下!!

--
※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) 
◆ From: 140.112.125.33
推 HEK293:就，你純化的所謂「上面的band」，裡面還是有很多沒切乾淨
→ HEK293:我個人認為4.7k與4.0k是無法分辨的兩條
→ HEK293:所以他沒有又長出來，是你根本沒切掉。
推 mesenchymal:推HEK大
→ puec2:多挑幾顆吧
→ ai760721:挑了16顆挑到一顆了!!
推 puec2:恭喜~