推 KittyGod:老化的菌應該指的是已經過了stationary phase而要進入 05/24 15:30
→ KittyGod:死亡了, 如果是這樣表示細菌養太久了 05/24 15:31
→ KittyGod:一般實驗所謂的O/N應該沒有到18hr那麼久 05/24 15:34
推 icome:沒錯 菌在TB會長超快 12h就全滿了 在搖下去會一堆死菌 05/24 18:57
※ 引述《poulnew (poulnew)》之銘言：
: 最近從中研院購入shRNA，且含2組 negative control(shGFP,shRFP)
: 目前一切正常，惟有這兩組negative control(shGFP,shRFP)無論麼抽
: 所得到的plasmid產量都大概是實驗組的1/5而已，所有培養& mini prep.的條件都
: 與實驗組一樣
: [incubate 16-18h+shakeing 200rpm / TB(Amp plus100ug/mL / Qualegen kit]
: 可以確定的是，我已經將抽mini菌液的量提高到4mL，也確定離下來的菌非常多。
: 但是抽出來的量還是低於實驗組，最近即將要抽大量，想在抽大量前解決此事。
: 剛爬文後有些頭緒，但還是麻煩各位先進再給個建議。
: 1.是否為菌種老化，但菌種老化不是跟生長速度有關?會造成質體產量過少嗎?
: 2.抽質體時P1,P2,P3體積拉大，讓lyse效果增加?? 純粹個人想法
: 最後想問，是否有實驗室剛好有negative control shRNA菌種，可否分一些給我培養。
: ps我人在台北石牌這
這個很好解決啦 答案就是 1.
你的菌種在TB裡面可能長太快 聽到離下來的菌"非常多"就知道不妙了
老化的菌裡面的plasmid量的確會減少
我以前還遇過完全抽不出東西的 用掉了兩盒MIDIPREP KIT 怎麼抽就是沒東西
菌量也"非常多" 解決方法就是縮短培養時間 縮短到12小時 我現在用的條件甚至
10小時就可以抽miniprep. 只不過要用特殊kit :)
這真的是一個很打擊信心的實驗問題 因為你一切都照procotol做 嚴格要求自己要
養16-18小時 但是抽不出來就是抽不出來
你實驗組的plasmid可以拿到的原因 可能是你的菌帶有實驗組plasmid 生長速度會比較慢
所以16-18小時以後還有足夠的plasmid 但其實如果你縮短培養時間說不定可以拿到更多
的plasmid.
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