[方法] 處理cycloheximide後蛋白的normalization

[laevulose ()]

最近念paper看到的實驗

作者想看A蛋白是否可以stablize B蛋白
於是使用cycloheximide treat細胞
(因為cycloheximide可抑制translation)

作者先對細胞pretreat A蛋白
再加入cycloheximide
之後收不同時間的cell lysate做WB偵測B蛋白
另外偵測tubulin當作loading control

弔詭的是
既然cycloheximide會抑制translation
那不是也會抑制tubilin的translation嗎?
這樣還可以用tubulin來normalize嗎?

還是說
因為加的劑量一樣
所以tubulin應該會被抑制相同的量(?)
因此一般的housekeeping gene仍然可以拿來做normalize?

還請版上各位先進為小妹解惑
謝謝!

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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) 
◆ From: 140.112.84.204
推 aceliang:half-life 長短是關鍵
→ williamyang:推樓上
推 mesenchymal:推一樓
→ laevulose:!! 所以說 只要B蛋白半衰期比tubulin短就可以以tubilin
→ laevulose:做normalization囉!?
→ williamyang:tubulin的half-life大約是兩天
→ laevulose:了解!謝謝樓上各位~