[求救] 酵素動力學數值分析問題

[muffinex (bji4h6)]

先感謝各位大大解答。

我最近再測酵素動力學時

算出來的Vmax 達7百多mM/min
        Km為 2百左右mM

這樣的數值大到有點嚇到我覺得我實驗是否有問題......

酵素的比活性為39 U/ML

請問各位，Vmax 及Km 的數字，有一定的範圍嗎?

再請問如果酵素有稀釋的話，在做計算時，需要把稀釋因子乘回去嗎?


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◆ From: 140.118.160.191
→ jeol1620:比活性的單位應該是U/mg，如果你在測活性的時後基質有用
→ jeol1620:到兩倍Km的話(飽和)，Vmax換算出的Kcat應該跟比活性很像
→ jeol1620:各種不同的酵素動力學數值差很多，參考其它相似度高的酵
→ jeol1620:的酵素看看哩
※ 編輯: muffinex        來自: 140.118.160.191      (06/08 18:42)
→ jeol1620:動力學的話不同濃度的基質都要用同樣的最終酵素濃度來做
→ jeol1620:這樣才能將計算Kcat=Vmax/[enzyme] 所以有稀釋放同體積
→ jeol1620:就是放進去的濃度變少
→ jeol1620:對了如果要跟別人比的時後要注意單位，常常在跟老闆討論
→ jeol1620:為什麼別人的數據都那麼漂亮的時後仔細一看才發現單位有
→ jeol1620:動手腳，有時後也可以用別人測活性的數據反算動力學有沒
→ jeol1620:有異常，有時後明明相似的酵素動力學卻天差地遠....
→ muffinex:小妹資質駑鈍，我都有用相同稀釋濃度的酵素作動力學實驗
→ muffinex:但數據換算出來的Vmax跟Km要不要把稀釋倍率考慮進去呢?
→ jeol1620:不需要哩 酵素加的少只是慢一點到平衡不會影響反應特性
→ muffinex:感謝!!!
→ muffinex:後來詢問老師，發現Km不會隨酵素濃度變化影響，為固定值
→ muffinex:只有Vmax會有變化
                               06/11 18:28
※ 編輯: muffinex        來自: 140.118.160.191      (06/11 18:30)
→ jeol1620:Vmax應該是基質飽和的速度，酵素放濃還是一樣的最高速度
→ jeol1620:應該是指Vmax/酵素濃度出來的Kcat會有變化，通常Vmax不都
→ jeol1620:要再換算成Kcat?
→ jeol1620:我也來去找老闆確認一下好了XD 搞不好是我記錯了也不一定