[討論] 關於實驗設計的問題

[cdkcyclin (ilovesuju)]

我的實驗假設是A protein會增加N protein的表現量(或穩定度 或活性 尚未知)

我的老闆認為，同時co-transfect 表現A和N protein的plasmids到細胞內時，

應該要看到N protein上升。

但我不這麼認為，因為這樣變因就很複雜了。

不管是transfection efficiency的差異，

或是promoter之間的競爭(因為兩個plasmid皆由CMV調控)，


但我老闆似乎不接受我的看法，

各位版友們有沒有更詳細的解釋或是觀點可以跟我討論呢?

謝謝各位!


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◆ From: 95.117.109.93
→ Invec:如果老闆堅持要做co-transfect的話 我會做 1. N only
→ Invec:2. functional truncated A + N and   3. full length A + N
→ Invec:然後比較N的表現量
→ blence:推樓上,不過"老闆是對的",怎樣的對自行推敲
→ blence:只要送A進去之後用WB看N的變化就知道結果了,co-trans太厚工
→ blence:畢竟任何的事前觀點都無法精準預測A與N的唯一情況,但是A與N
→ blence:在co-transfect各種現象也能找到對應的解釋來套用實驗結果
→ blence:我最近的A,N符合你的實驗假設,不過當co-tr A,A+N,N,以適當
→ blence:vector調整transfactant後,的確看到A存在些微增加N表現,但
→ blence:A卻比單獨A來得少,矛盾的是我卻不能就此認定N會抑制A,如此
推 joseph103331:簡單一點 就是看mRNA的表現量啦
→ joseph103331:而且在你的假設中 是透過後轉譯修飾還是轉錄調控?
→ joseph103331:不過我想會牽扯到表現 應該是後轉譯修飾了啦XDD
→ joseph103331:轉錄調控做reporter assay就OK了
推 chaunen:qPCR mRNA若有增加 探討promoter活性 or mRMA stability
推 chaunen:qPCR沒有增加 表示蛋白質的 穩定度or轉譯or降解  改變
→ chaunen:BOSS會這樣想 大概proteinA 不是transcription factor
→ chaunen:猜proteinA修飾N使其穩定 or proteinA抑制 降解機製
→ cdkcyclin:哈哈, j大和c大好像偵探啊!都猜對了!