[求救] qPCR的NTC一直有東西

[xavieraho (RussianDoll)]

大家好

最近同學做的qPCR一直不成功

她遇到的問題是

NTC和sample的melting curve peak都會出現在同一個位置

一開始覺得是水汙染，重作之後還是一樣的結果

最後連sample和primer都重新稀釋再做也是一樣結果

請問primer dimer會讓NTC跑出東西嗎?

除了以上的可能性

還有甚麼原因會導致這樣的結果?


謝謝大家

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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) 
◆ From: 140.136.180.95
→ roy047:可做一組不放primer的看看 primer dimer也會變出ds啊
推 ithinksoiam:我覺得可能是primer汙染到template
→ roy047:原po說primer有從stock重新稀釋了@@
推 ithinksoiam:如果sample和NTC的peak是同一個位置 應該是同一個產物
→ ithinksoiam:stock也有可能會汙染阿@ @a 我有認識的就是這樣
推 puec2:喔 把pipetman拿去清一清 裡面被汙染了
→ puec2:這蠻常發生的 以前有聽過有人做northern 做到最後才發現
→ puec2:PCR出來的probe是別種東西 汙染源就是pipetman
→ puec2:你們如果很常做某個基因 比如說你抽1mg的maxiprep
→ puec2:到桌上 手套上 pipetman裡面 可能都有 ng~pg的 DNA殘留
→ puec2:*那麼
→ puec2:還有用簡稱以前要先用全名講一遍 不然誰看得懂阿..
→ puec2:殘留的DNA對別的實驗可能沒有影響 或者影響不大
→ puec2:但是對PCR這種敏感的實驗 影響就會很大
→ puec2:我會建議洗完pipetman以後 都用filter tip操作qPCR
推 jabari:qPCR慘物拿去跑膠啊......
→ JanChang:ntc應該有作PCR或qPCR都看的懂吧？不過先寫清楚當然較好
→ kunhan1013:我有做PCR和qPCR 我就看不懂NTC是啥
→ kunhan1013:可以把pipetman拿去曬曬UV 可能就會頭好壯壯
推 ararthur:filter tip+1 跑膠也可以馬上看出來 size跟當初設計的一
→ ararthur:樣就是primer被template汙染 有時候設計片段太小也會溫度
→ ararthur:overlap 那就重設計吧   我是覺得NTC paper裡常看到啦