[求救] western blot internal control

[satan317 (打完回老家結婚)]

因為要壓量比較少的 protein

需要 load 大量的 sample，大概 100ug

但 internal control 的部分，會黏在一起

well 與 well 間分布清楚，導致無法定量

有試過 actin 跟 tubulin 都會這樣

也試過把 sample 量降到 80ug

不過不只要壓的 protein 很淡很模糊

internal control 也還是會黏在一起

想請教版上的大大們有沒有人知道

有什麼表現量比較少的 internal control

或是經過什麼處理可以解決這個問題


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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) 
◆ From: 140.115.48.65
→ roy047:internal control另外跑一片 loading 5ug/well這樣
→ satan317:可以這樣做喔!!
→ xxtomnyxx:internal control 通常都是表現量海量的 house keeping
→ xxtomnyxx:gene， 我會建議試試看把inter control的一抗稀釋更多倍
→ satan317:有建議得量嗎 我目前試過用1:3000 跟1:1000效果差不多
→ satan317:差別只在曝光時間要在久一點 但lane的寬度不變 是不夠稀
→ satan317:嗎?
→ a90648:我們家actin和tublin都是1:10000以上
→ roy047:lane寬度不論抗體怎稀釋都不會變啊...因protein分佈就那樣
→ roy047:另外跑一片然後註明都是同一管sample 但loading不同量即可
→ puec2:這是因為滿出來了吧 不能改變loading量的話 建議改跑
→ puec2:大片Gel 另外跑一片 感覺起來有點 "奇怪"
→ roy047:看原PO老闆接不接受吧...也可以每兩格well才load一個sample
→ roy047:中間空well load 1X sample buffer以隔開
→ roy047:不過同一批sample如果要看超多種protein, 不可能全部只跑
→ roy047:一片然後通通看完
→ roy047:stripping也有次數限制
→ satan317:也只好問問老闆答不答應了
→ satan317:謝謝各位大大
推 joseph103331:再跑一張+1 通常一個sample要跑個三四張
→ joseph103331:才有辦法依據蛋白質的表現量用出適量的western條件