Re: [求救] 關於細菌蛋白表現

[w061820 (zerofield)]

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: ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
: ◆ From: 114.38.50.52
: 推 licat:XL1-blue(DE3)也是pET系統常用的host strain之一             06/28 09:35
: → licat:pET系統主要是跟T7 promoter以及DE3有關  建議細讀一下手冊   06/28 09:38
: → KittyGod:XL1-blue非常少看到有人拿它來表現蛋白質耶               06/29 10:00
: → KittyGod:pET system應該是利用T7 promoter搭配T7 polymerase的菌   06/29 10:01
: → KittyGod:XL1-blue好像沒看到有表現T7 polymerase的基因耶 要詳查   06/29 10:02
: → KittyGod:要不要跟老師說一下啊                                   06/29 10:02
: → KittyGod:我看到的XL1只有拿來保存植體用                          06/29 10:03
: → KittyGod:BL21很容易買到                                         06/29 10:04

不好意思 我現在才想到要上來看...
兩位大大 我不知道要相信誰耶XD

不過學弟已經開始在作了...
我相信他老闆應該不是很懂
因為他老闆是聽來的....

我們實驗室是不會拿XL-1來表現蛋白啦
但是我實在不確定
所以上來問問
話說我要相信誰XD

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◆ From: 114.38.28.169
推 zeroHa:Bl21&bl21star 很常用來表現蛋白，至少我待過的三個lab都是
推 zeroHa:以此來表現，除非有特別的因素才會用rosetta或是其他的表現
→ zeroHa:保存Plasmid主要是用dh5alpha,因為比較不會有mutation
→ j31yo20:有用過dh5a 表現蛋白 還有出現其他顏色的菌落
推 shenhsu:一般都用BL21 但有時候表現不出來也會嘗試XL1和DH5a之類的
→ jeol1620:XL1-blue 跟 XL1-blue(DE3) 是不一樣的哩，pET質體是T7
→ jeol1620:promoter 就只能放XL1-blue(DE3)才能表現，其實應該去查
→ jeol1620:菌種原廠的說明書裡頭的基因型，看有沒有把rec之類的拿掉
→ KittyGod:有XL1-blue(DE3)的相關資訊嗎? 我一直找不到 有BL21(DE3)
→ KittyGod:還有一般的DH5a應該不能應用在pET system
推 licat:沒有DE3的話都不能用 有DE3的host則都有一試的價值
→ licat:因為有時理論是理論 哪個host適用你的蛋白質還真不試不知道
推 licat:實驗室常用的E. coli分為K12與B strain兩種
→ licat:BL21是屬於B strain, 常用於cloning的都屬於K12
→ licat:因此是可以用XL1-blue(DE3)試試看的 我自己有同時做過
→ licat:同一個pET表現質體 在這兩個host中 表現量有很大差異
→ jeol1620:剛查了一下XL1-blue 是strategene的產品
→ jeol1620:http://www.chem-agilent.com/pdf/strata/200249.pdf
→ KittyGod:這個stratagen的XL1-blue也是沒寫他有T7 polymerase
→ KittyGod:哈哈 我一直查不到市售的XL1-blue(DE3) 所以好奇