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之前有做過把plasmid DNA transfection 進入細胞裡,但是細胞幾乎都死亡了 我的plasmid DNA 是從DH5a萃取出來的,我沒有用去內毒素的kit 我想問的是,做transfection 的plasimd DNA 是不是一定要去內毒素呢? -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 120.114.191.159
roy047:打活體的比較需要 用在細胞我也是用普通kit抽的 07/16 12:40
roy047:如果是污染的話較可能是回溶用的水或是transfection時問題 07/16 12:40
vancent:沒必要~問題應該是出在你TRANSFECTION的步驟 07/16 12:46
j31yo20:我是用polyjet 的reagent 07/16 14:01
j31yo20:步驟都是照potocol耶 07/16 14:02
puec2:先告訴大家幾個條件 07/16 18:16
puec2:1.cell strain, cell number, 12 wells or 6 wells plate? 07/16 18:17
puec2:2.amount of DNA, amount of transfection reagent used. 07/16 18:18
puec2:3.Brand of transfection reagent. 07/16 18:18
puec2:4.Did you use GFP control plasmid 07/16 18:18
KittyGod:不去乾淨LPS也許不會使細胞死亡 但微量的LPS一定干擾data 07/17 06:39
j31yo20:24well, 0.24*10^6 cell/well, 0.5ug DNA per well, polyj 07/17 10:17
j31yo20:et reagent , not use GFP plasmid control 07/17 10:17
roy047:cell strain? 2.4*10^5種24well算爆多了@@ 07/17 10:26
roy047:貼附型細胞:種完貼隔夜後看細胞狀況 健康才做transfection 07/17 10:34
puec2:細胞是蠻滿的..DNA這個量應該還好 除非polyjet剛好對你的 07/17 11:22
puec2:細胞毒性特強 07/17 11:23
j31yo20:恩恩 我在做做看吧!THX ALL 07/17 19:40
icome:應該是polyjet毒性造成的 量稍降低一點 07/17 22:20
jsi:沒有target gene的vector control也會產生細胞死亡現象嗎? 07/18 00:08
roy047:這要看你vector上有接什麼會表現出protein的東西啊.. 07/18 08:12
j31yo20:正在跟老師討論是否要用control plasmids 07/18 11:18