Re: [求救] Protein以urea回溶 在接做ELISA問題

[puec2 ( .＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿.)]

這要看抗體
Polyclonal antibody應該不受影響
Monoclonal antibody依其epitope特性分成兩種：
Linear epitope
Conformational epitope

顧名思義 linear epitope只要序列對了就會bind

Conformational epitope則是認蛋白質三級結構中 不同位置的amino acid所組成的特定立體結構

如果不是太奇怪的蛋白質 可以染western blotting的monoclonal antibody應該都是認linear epitope.

※ 引述《e123917123 (黑羽神風)》之銘言：
: 版上眾高手們好
: 小弟本身對蛋白質相關實驗幾乎沒做過,目前正在做E.coli的inclusion body的蛋白質片
: 段,破菌之後,接著打算把此蛋白質跑SDS-PAGE及定量後,再接著做ELISA的實驗
: 實驗室的人說此蛋白是不可水溶所以需要使用Urea回溶
: 但是又聽說Urea可能會影響到ELISA的抗體鍵結問題?但他們也不太肯定,因為目前的學生
: 沒在做相關的ELISA實驗部分~
: 所以想請問使用Urea溶過的蛋白質經定量後可直接拿來做ELISA實驗嗎?
: 還是需要再過透析?
: 另外此蛋白質有無建議保存的方式? 以後可能還需要用到繼續測ELISA 怕會降解掉~
: 感謝各位高手~~~

--
※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) 
◆ From: 219.80.238.185
→ e123917123:所以是linear epitope的話 有urea存在去做應該也OK囉?
→ e123917123:因為加入抗原後 是會先washing三次再開始接一抗 不知道
→ e123917123:到底會不會有差?
→ puec2:UREA去乾淨就好啦
→ e123917123:這問題 小弟目前沒經過透析 直接做ELISA應該是OK了
→ e123917123:感謝各位解答^^