[求救] 請問流式細胞儀的cell cycle上機步驟

[skyofsilver (silversky)]

各位板大好

想請問各位使用流式細胞儀PI染色看cell cycle的機器操作方面



之前老師是有操作給我看過

簡短操作如下(儀器方面): 1. 將FL3(PI)由原先的Log調為Line(線性)

                           開啟FSC SSC 及 FL3的Histogram


                        2. 開始上Sample 並調整FSC SSC 並Gate所要看的細胞群

                        3. 調整FL3的Histogram 調整Sub G1, G1, S, G2/M的位置

                        4. 調整好之後 開始收取Data



我想問的是: 之前有上過課 聽說PI染劑非常的黏 有時機器會將黏在一起的兩顆細胞

            誤判為一顆 (ex. 2n+2n=4n) 所以要做一個步驟排除這種誤判

            我在與老師學實驗的時候也有提出這個問題 不過老師卻說不用 但並沒有

            說為什麼


            想請問各位板大 我們老師這樣的做法是正確的嗎? 還是真的少了哪一個步

            驟呢? 謝謝!



--
※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) 
◆ From: 218.173.34.99
→ roy047:用FSC就能把黏一團的細胞排除在外了吧...
→ skyofsilver:喔喔! 所以這種上法是正確的囉?
→ roy047:有control組比較應該就沒什問題...畢竟機器操作就那樣
→ roy047:在意的話就在上之前先輕輕vortex
推 qiet:http://ppt.cc/Z5jd  p15開始, 有教你如何排出黏在一起的細胞
→ qiet:FSC無法分出來的
→ roy047:原po可以參考 我是染PI都沒碰過這問題啦...
推 ZnU:5樓正解，請用FL3-W對FL3-A排除doublets
推 ZnU:當然像一樓都沒遇過是最好的，這跟cell type也很有關係
→ skyofsilver:感謝各位大的解答 所以說明書上p15的方法是要每次上
→ skyofsilver:都做嗎? 還是覺得Data怪異再做呢?
推 potter:我是都做  反正也沒差到多少時間
→ skyofsilver:好! 謝謝各位大大! 我試試看!