作者ariel780102 (艾利兒)
看板Biotech
標題[求救] SDS-PAGE雜問
時間Tue Jul 23 19:13:25 2013
大家好,我是跑12% gel的SDS-PAGE,
使用大片膠的直立電泳槽,他裡面就有水流的冷卻裝置(設置在4度C)
但每次都常常會容易歪掉(以最旁邊最容易歪,跑一跑會變 / \ 這樣,但中間還算是直的)
因為我sample多,所以一次要loading 13個well,旁邊就很容易斜掉.
目前有在電泳槽外加上有深度的塑膠盒,跑膠時除了內部冷卻還在外圍堆上冰,
且碎冰隨時補充.
出來的成果雖然有直一點但是要細部去看時最旁邊還是斜斜的
我是固定電流前半小時20mA,之後跑到快跳海大約五~六小時設定在40mA,
設過35mA也是斜的.
APS現配,running buffer也是之前才配10X,其他SDS大約兩年,Acrylamide一年多冰4度C
tris 也是冰兩年左右(有調過pH值),不知是不是要換新的?
還有一個問題是band很不sharp,我是用coomassie brilliant blue G-250去染色,
因為之前有爬文說不能放太久,染劑避光保存已經一兩年,是不是該換了呢?
還有爬文到說coomassie brilliant blue R-250的使用,因為我只是跑普通的12%的GEL
如果換成coomassie brilliant blue R-250 band會更sharp嗎?
一堆問題 謝謝大家
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◆ From: 140.117.93.128
※ 編輯: ariel780102 來自: 140.117.93.128 (07/23 19:14)
推 leoblack:你跑太快了,我都是15mA從頭跑到尾 07/23 19:30
→ ariel780102:我一次跑兩片膠,15mA也可以嗎? 07/23 19:42
→ Ianthegood:可以阿 電流越低才越穩吧 07/23 20:47
→ blence:最兩端空的well都補上PSB就不會外擴了 07/23 22:10
推 leoblack:安培要加成,兩片膠就30mA,你所謂的大片膠是多大!? 07/24 10:05
→ dehydrogenas:我猜是17公分的 空的well要補滿dye才不會歪 07/24 14:46
→ ariel780102:電泳槽是Hoefer SE 600 Ruby,常寬大約有15cm吧 07/24 14:46
→ ariel780102:長寬 07/24 14:46
→ ariel780102:請問是補4Xdye嗎? 07/24 14:48
→ dehydrogenas:補一倍的 也有可能是你內槽有漏才會歪斜 07/24 14:49
→ ariel780102:有仔細測漏過,應該是沒有,且拿起來時下方沒有殘膠 07/24 23:40