推 leoblack:1.RE在跑膠時還會卡在gel上?!不太合理喔 07/26 17:32
→ leoblack:我倒是覺得是否是column的membrane壞了~ 07/26 17:32
※ 編輯: puec2 來自: 211.76.175.170 (07/26 17:58)
→ puec2:RE黏在DNA上是比例問題 不是全有全無 07/26 17:59
推 leoblack:我比較好奇的是~哪家的RE的Exonuclease活性這麼強~ 07/26 18:29
→ leoblack:可以在gel elute時把band切的如此徹底乾淨到沒band 07/26 18:30
→ leoblack:這麼強的活性在反應時不把DNA切光,卻靠殘留量把band切光 07/26 18:35
→ blence:我不覺得是degrade,而是大塊gel跟elute後小量test視覺差異 07/26 19:38
→ puec2:真的是degrade 跑電泳check我還可以看到degradation拖的尾巴 07/26 20:33
→ puec2:至於活性 如果你用傳統方法抽過植物genomic DNA 07/26 20:34
→ puec2:你應該會知道有某些nuclease就算你用phenol/chloroform/IAA 07/26 20:34
→ puec2:洗過N次 就算你用超高速離心 然後再過butanol洗N次 07/26 20:35
→ puec2:nuclease還是在那 你溫度一到就把DNA degrade給你看 07/26 20:36
→ puec2:另外RE的活性就是這麼強阿 現在不是有 5min RE在賣嗎 07/26 20:38
→ xxtomnyxx:應該是說哪家的 RE star activity 這麼強吧... 07/26 20:57
→ puec2:我就說吧，是可以切很快的SphI 我沒有說哪一家喔 :) 07/26 21:20
→ puec2:我猜啦 我改用SacI/BamHI就沒事 一放SphI 稍微放久一點 07/26 21:21
→ puec2:就degrade惹 07/26 21:22
→ xxtomnyxx:某家有做 SphI-HF，如果非用 SphI 不可的話，可以試試 07/26 21:53
→ xxtomnyxx:價格一樣，不過我沒有用過，搞不好這就是原苦主用的也說 07/26 21:53
→ xxtomnyxx:不定wwwwww 07/26 21:53
→ puec2:不要咒我!!!我以為我不用再碰那個東西了!! 07/26 22:01
→ leoblack:pu大,我覺得是SphI使用的buf剛好使得conta的nuclease好切 07/27 00:36
→ leoblack:所以才會degrade,至少我用過SphI沒你講得這麼誇張 07/27 00:37
推 ad1980:FastDigest 的 EcoRI 切半個小時以上就有 star activity 07/27 23:23
→ jsi:我會先去跟別人借沒問題的gel extraction kit做做看，還有問題 07/28 23:47
→ jsi:再去查原因。 07/28 23:48
推 ararthur:我也不覺得是degrade 8K試著把elution buf 加熱到80度再 07/30 10:21
→ ararthur:elute吧 不過puec2遇到的應該真的是degrade 有tail的話 07/30 10:23
→ ararthur:另外*activity應該比較不會出現tail 而是出現雜band 因為 07/30 10:24
→ ararthur:*act 該是Enz的specificity下降認錯mer的緣故 而不是什麼 07/30 10:25
→ ararthur:DNA substrate都會切 07/30 10:26
推 ararthur:我還想問問樓上上問的FastDig EcoRI 半小時以上有*act的 07/30 10:28
→ ararthur:是哪一家?? 我要避開 EcoRI是我的幸運cut site XDD 07/30 10:29