[求救] 流式細胞術的陰性對照問題

[yunchen1105 (小土塵)]

各位好，這是我第一次在這個板上發言，請多指教！


我的本科是藥學系，但是也有細胞生物學的必修課程，加上有在實驗室做實驗，最
近遇到一個關於流式細胞儀的問題。目前做過一次分析血球中的活化T細胞，但是
原理不清楚。


是這樣的，我們的實驗總共用了三種試劑：
1.CD45/CD14
2.IgG1/IgG2a
3.CD3/HLA-DR


經由看了許多相關資料之後，知道1和3的作用是什麼，唯2非常不清楚。只知道和
陰性對照或是說同型對照有關，但網路上關於陰性對照的資訊非常少，不是都是複
製貼上的就是產品的廣告，只有一篇和數據分析有關的文章說明得比較清楚。


我的問題：

1.文章上面寫說流式細胞儀實驗的對照有兩種型式，一種是讓完全沒染過色的細胞
　先跑一遍，另一種就是抗體的陰性對照。請問第一種也就是先跑沒有染色的部分
　是為了將其設定為陰性，之後再消除本身就會發出螢光的細胞的數據嗎？

2.請問第二種也就是IgG的陰性對照的原理為何？看過最多的說法是IgG1會和細胞表
  面上的非特異性受體結合，所以要用另一種isotype(IgG2a)來消除背景染色，請
　問背景染色又是什麼東東？

3.為什麼要消除會和IgG1結合的細胞呢？如果細胞更純更好的話，那麼細胞上那麼
　多種受體，為什麼只做一種抗體的同型對照，有沒有做很多種的？


謝謝看完～
我是從為什麼要加第二種試劑就不懂了，希望知道的大大可以描述得具體點，謝謝！




















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◆ From: 115.80.19.183
→ puec2:你用中文寫我真的看不懂
推 conective:1.是for 調整儀器設定用 2.是for 判斷陰陽界線用
→ conective:用IgG1或是IgG2a是跟實驗中會用的的抗體來源有關
→ conective:2稱為 Isotype control 是作為抗體非特異性結合的判斷
→ conective:依據 特別是當你的細胞表現該Marker強度不強時
→ conective:或是有無表現強弱之間差距不大 作為判斷表現強度的準線
→ conective:簡單的說 活化的細胞的螢光強度 要大於Isotype control
→ conective:代表這些多出來的強度 不是非特異性結合 而是真正有表現
→ conective:2是你在後續分析時的判斷陰陽標準
謝謝指教我會加強表達能力～
非常感謝C大，願意詳細回答我的問題，今天問了一位博士之後發現大概和您說得差不
多，原來第一管加的就是會去認CD marker的IgG，所以第二管才加不會去認CD marker
的IgG去做對照，我想第一管應該就是你所說的＂實驗中會用的抗體來源＂吧！
我大概懂了，感恩～
※ 編輯: yunchen1105     來自: 101.13.168.30        (08/02 11:32)