[求救] 肝臟冷凍切片前處理灌流

[bravelover99 (劉SIR)]

想要請問板上有做過mice小鼠的肝臟灌流實驗的大家

mice的組織不如rat來的大

實驗目的是要為了做冷凍切片染ORO(lipid)的檢體包埋前處理

打算在小鼠犧牲後  先用PBS灌流肝臟(替換血液)再用4%paraformaldhyde固定O/N

>>surcose脫水>>OCT包埋>>切片


所以來到版上詢問

怎麼做肝臟灌流>"<?懇請有做過的大家幫忙提供方法

是所謂的浸泡、亦或是dropper大量沖洗嗎??懇請賜教~~感恩^^

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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) 
◆ From: 163.25.118.58
推 tchan:準備3mlPBS，右心耳(大靜脈處)稍微剪開，PBS針頭從心尖注入
推 milkpa:同上，不過3ml不太夠，可用50ml針筒裝PBS or PA，依樓上的
→ milkpa:方式，將裝有蝴蝶針（anyway,夠細就行）插到心間，再剪開
→ milkpa:右心房，此時血液會大量流出，但心臟仍持續跳動，利用循環
→ milkpa:將血液帶出，當流出的液體變成透明（PBS）後，再置換成PA
→ milkpa:，因血液已經流光，故血管不會塞住，可以將PA送往全身做前
→ milkpa:固定，可適時按壓臟器確認，變硬就可將所需器官組織取下
→ milkpa:做後續處理，當然，按照你自己寫的取下固定也行啦......
推 tchan:(sorry手誤)我原本要打30ml，可以多準備些啦，邊打邊觀察
推 short945:不一定要到變硬，看到目標臟器或附近肌肉抽猝就差不多了
推 goshr:以前老師說灌到眼睛的紅色不見
推 short945:只要PBS把血液取代就會讓眼睛的紅色不見，這不代表灌好了