看板 Biotech 關於我們 聯絡資訊
已經使用yT&A vector做實驗很久了,但是最近發現,接到yT&A vector後去定序, 發現要把forward定序完的那一條做reverse-complement才會跟reverse定序完、 原本的sequence符合(通常不是把reverse 那一條作reverse-complement),這樣 讓我覺得在把sample做PCR完後,接到yT&A vector上有可能反接吧? 有沒有人 跟我發生一樣的情況,那只好重做clone嗎? -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 120.114.191.88
puec2:你如果把TA cloning的原理再看仔細一點就會發現 08/12 14:26
puec2:反接是很正常的事 08/12 14:26
CD133:一樓正解,不過如果你當初在primer有設計restriction enzyme 08/12 17:24
CD133:cutting sites,反接也就沒差,不影響你sub-cloning 08/12 17:25
poison7202:您的TA還要再多做一點~看看原理吧!! 08/12 19:18
j31yo20:這反接的機率有點高 transformation完 長出四顆,都是反接 08/12 20:01
j31yo20:ok 謝謝大家嚕 08/12 20:02
puec2:讓子彈再飛一會 08/12 20:10
aceliang:機率不會高,就50%,運氣問題 :) 加油 08/12 20:31
xxtomnyxx:不會真的是 50%,經驗上有些序列就是很容易都是正接, 08/12 21:12
xxtomnyxx:或是挑了幾十顆都是反街的例子也有。 08/12 21:12
xxtomnyxx:話說只有 4 顆也太少了吧? 08/12 21:13