[方法] 抑菌圈實驗問題

[panyuyun (panyuyun)]

想請問一下有做過抑菌圈實驗的前輩

我查到標準實驗的步驟是直接購買commercial的抗生素paper disk

自備sample的話可將sample浸泡在paper disk中

或將paper disk至於agar plate上，再滴上sample




我的問題有以下幾個：



1. 將細菌接踵至agar plate上，我查到兩種做法
   一是取綿紗布浸泡在10^8 CFU/mL的菌液中，再分三次塗抹在agar plate
   另一是取培養o/n的菌液100 uL至agar plate，以三角玻棒均勻塗抹

   想請問兩種方法的效果?

   沒用過綿紗布，操作三角玻棒比較熟悉
   那我應該取多少濃度的100 uL菌液塗盤較恰當呢?



2. 之前做其他抑制圈實驗用過的paper disk是厚的
   (一面有點像很紮實的棉花的質感，一面是像一般濾紙的質感)

   但爬文發現有人說可以直接用一般濾紙用打洞機打就好

   想請問兩者的差別?



3. 我的sample是非常黏稠的液體，呈現有點膠狀的狀態
   感覺不太可能浸泡到完全吸收
   如果要將sample滴在agar plate上的paper disk
   體積建議多少?

   或是有沒有人做這個實驗是可以直接滴10 uL在agar plate上的?



非常感謝大家耐心看完這篇落落長的問題文
也跪求有經驗的前輩幫忙解答了 <(_ _)> 謝謝~

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◆ From: 140.116.193.137
推 Invec:1 我們是將菌液與降溫的agar混合後快速倒到plate裡
→ Invec:2 是用電泳用的濾紙直接以打洞機打洞 接著用鎳子把 paper
→ Invec:disk放到已冷卻(並吹乾)的 plate中間 最後滴上 10uL待測物
→ Invec:倒置培養 (吹乾和倒置都是避免plate表面的液體流來流去)
→ Invec:液體非常黏稠可以考慮5uL 只要確定可以均勻散布在disc上即可
→ panyuyun:好~ 謝謝您!! 我會再試試！
→ KittyGod:按CLSI標準應該是將菌液調整成0.5的McFarland值再塗抹
→ KittyGod:然後用swab塗即可
推 jerry761031:推樓上