[求救] Hif1 alpha看不到band

[jas123654 (jack)]

如標題
小弟目前要針對hif1 alphe做western
但是一直看不到band
只有加了CoCl2的positive control有強烈的band
control(什麼藥物都不加)
以及加藥組(加Fascaplysin)的完完全全沒有band

小弟實驗室在收lysate是先加PBS
 收到沉澱物後才加lysus buffer(RIPA NaF PI Na3VO4)


爬了下舊文  似乎有人覺得應該先加lysis buffer
我覺得是不是用PBS刮細胞的時候我的Hif1就被degrade光光了

不知道有沒有高手能解惑的?

P.S.  CoCL2作為positivve control有押出來漂亮的band
所以可以排除跑膠 transfer 抗體 ECL的問題

--
※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 118.169.212.59
推 leoblack:你確定你的treatment有起作用嘛!?HIF1α是inducible的
→ leoblack:一般normal情況下本來就看不到HIF1α表現
推 mesenchymal:針對你的本文,你也可以試著直接lysis buffer刮細胞
→ mesenchymal:或是用trypsin to detach cells
→ mesenchymal:另外一樓講的可能性也很高
→ blence:postive control明明有看到,標題卻說沒看到
→ blence:沒看到band很明顯不是收lysate的問題,而是你沒加CoCl2
小弟PTT首PO  已經補充一些資訊  請見諒
※ 編輯: jas123654       來自: 140.112.58.20        (08/27 08:00)
推 hermannhesse:想請問是用哪一家的抗體呢? THX~
一抗是BD的  編號610959  網路上好像蠻推這隻的
※ 編輯: jas123654       來自: 140.112.58.20        (08/27 10:21)