[求救]請問繼代細胞方法

[jkq (玩具)]

想請問大家 繼代細胞時 有遇過重新回溶細胞 有打不散的情形嗎

目前養的是 embryonic stem cell  所以下面有層feeder

用trypsin 作用4分鐘 之後 中和 離心 重新用medium回溶

但是 光用塑膠pipette 回溶  是沒辦法完全回溶

就還是有些細胞團塊 打不散 在懷疑是不是feeder也跟著起來

但是dish的feeder都還在

也試過將團塊沉澱下來 但這樣細胞量 真的不太準

想請問看看 是否還有其他方式 可以打散團塊

--
※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 140.128.67.246
推 zoom8080:Trypsin完後先用巴斯德管打一下在加medium中和試試看
推 aceliang:我以為ESC都是用scratch養 = =a
推 yuasa:加少量medium (1 cc),用1 cc Pipette打散
推 qiet:用2cc serological pipette 將細胞團塊刮下
  可以用刮的喔
→ qiet:繼代培養ES cell應該不建議將細胞將細胞打散成single cell吧?
的確不能打成single 但剛開始練習 老闆說先把大團的打小 single也沒關係
推 leoblack:將trypsin離心去掉上清液後~先敲敲管子或刮刮racker~
※ 編輯: jkq             來自: 114.46.156.131       (09/18 20:36)
※ 編輯: jkq             來自: 114.46.156.131       (09/18 20:38)
推 ljii:stem cell不就是要一團一團的passage嗎???@@
→ ljii:要練習拿HEK練習最好
一團一團是沒錯  但會變的大小不一  pa的時間點就難抓
※ 編輯: jkq             來自: 221.120.65.20        (09/19 21:14)
推 marvelous13:ES要用割的！
推 conective:繼代就不是single cell的方式 練習打成single cell的目
→ conective:的是？ 你應該是練習打成小團就可以了
→ conective:而且用塑膠pipette打不散是正常的吧