[求救] 請教關於蛋白表現量的實驗問題

[jenever2117 (皇上 您害的小八好苦啊)]

請教版上的各位大大:


小弟另一個實驗是要觀察中草藥對於基因表現量的差異


目前是打算利用q-pcr來觀測結果


但是小弟對於pcr實在是沒有很大的自信
(之前clonning瘋狂失敗的後遺症)


想請問大家設計primer都是用什麼程式設計的呢?


選擇序列的考量點又有哪些?是將基因序列全部貼上程式去做設計嗎?


最後想請教用ELISA kit 會不會比較快或是方便(準確率會有影響嗎)?


或是有其他方法可以得出結果 請大大不吝指教

ps.老闆不准我用 western blot ><"

--
※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) 
◆ From: 42.70.238.242
推 naruto200420:可以用vector NTI，或者是網路上有專門設計qpcr引子
→ naruto200420:的程式，如果要跨intron要看你的基因有沒有解過結構
→ KerryWood:Roche有軟體可以設計 不過最好搭配Taqman的mixture使用
→ KerryWood:可以用LPS 刺激細胞分泌cytokine再收medium來測
→ KerryWood:但你養的細胞會不會分泌cytokine也要查一查
→ Ianthegood:RNA不能代表protein量 要不要講一下為什麼不准western
推 mesenchymal:我想不同方法看得點跟問的問題還是差距
→ mesenchymal:你必須針對你的問題去做實驗,並說服你的老闆
→ jenever2117:老闆覺得western很麻煩=  =
推 qiet:囧...連western都嫌麻煩....那還能做什麼....