[求救] SDS-PAGE 跑膠圖求助

[EDONIS (ED)]

請問我2小時跑出來的電泳膠，怎麼好像跑不動!!
跑了好幾片都長這樣!!@@
設定100V
http://ppt.cc/XvXl
是哪邊出了問題，有人知道嗎??求解ORZ
補上running buffer配方 10X electrophoresis running buffer:
In a final volume of 500mL of ddH2O, dissolve 15g of Tris-base, 72g of
glycine and 5g of SDS
先配10倍的，使用前稀釋成1倍!!
有蓋到WELL以上，沒有漏!!我看機器顯示是100V我設定也是100V

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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 123.195.15.103
推 HEK293:設定100V跟是否到達100V是兩回事，你是哪一個？
→ milkpa:buffer對不對，有沒有蓋到well以上（有沒有漏）
推 babylikeg:你的running buffer 有check嗎? 是自己配的嗎?
→ raiyu:buffer漏了?
→ Ianthegood:有stacking gel嗎
推 tsubasawolfy:他已經把stack剷掉了吧 上次有這情況搞半天結果是
→ tsubasawolfy:蓋子上的銅接頭生鏽嚴重 能通過的電剩一點點
→ tsubasawolfy:如果buffer都沒問題 也沒漏buffer 就檢查PSU,接頭,
→ tsubasawolfy:還有那條貴森森鉑金線
※ 編輯: EDONIS          來自: 123.195.15.103       (10/29 16:19)
→ storm780121:tris才15g?
→ blence:Tris是正常的,但你不該調pH,如果覺得跟往常有不尋常的發熱
→ EDONIS:我沒有調PH值!!我直接用了!!
※ 編輯: EDONIS          來自: 123.195.15.103       (10/29 22:33)
推 leoblack:是biorad就是是看~把內外buf都灌到一樣高跑跑看
→ blence:很反對上面做法，錯誤的情況不該也不可再用錯誤方法解決
→ Invec:buffer加到一樣高根本沒有幫助
推 fall199721:看這張圖的感覺很像是全部卡在Stacking gel 無法過去
→ fall199721:separating gel 那邊, 當初配SDS-PAGE的buffer PH值要
→ fall199721:不要再確認一下 ?
→ fall199721:還有就是 當初sample dye裡面有加beta-Me或者DTT嗎?
推 genep:我猜也是separating有問題 沒配錯的話check一下pH值.
→ puec2:可能是白金絲斷了
→ htLiu:下膠PH錯了
→ EDONIS:下層除了1.5M Tris-HCl (pH8.8)其他都沒調PH值!!
→ EDONIS:下層膠的配方我發文問過@@~~也曾懷疑過又重新查配方試了
→ EDONIS:跑出來也這樣!!@@sample dye我買配好的!!裡面都加了!!
→ EDONIS:板大有成功過的配方可以來信我在重新做一次確認下嗎??
→ blence:你是不是在重配Tris-HCl pH8.8或6.8之後就這樣了？
→ blence:以及你好像沒有回應你的sample到底在stacking或separating?
→ EDONIS:應該是跑過了stacking然後separating這裡好像卡住!!
→ fall199721:通常上下膠的PH值我都是調final的PH值 不會只調Tris的
→ fall199721:部分 以這張跑膠塗看起來比較像是Seperating gel那邊
→ fall199721:出了問題 最有可能就是你下膠沒配好(我以前也發生過類
→ fall199721:似這張圖的情況 再不然還有一點就是 你蛋白萃取的時候
→ fall199721:沒有處理好可能還留下大片段的DNA SAMPLE DYE裡面是否
→ fall199721:有還原劑也會影響Protein denature程度 但以你這張圖來
→ fall199721:看 感覺比較像是你膠沒做好 下次配再15ML/50ML tube裡
→ fall199721:請記得要混和均勻  不然會影響他跑膠得過程
→ fall199721:以上是一些意見 僅供E大參考囉^^
→ jsi:電源供應器是否誤設時間?
→ puec2:對了 電源顯示100V 那電流呢?
→ vandia:你的膠是做幾%的？？
推 NFkappaB:buffer有過白金絲嗎?
→ EDONIS:有過白金絲，是12%的膠!!我2小時時間到去停的!!