[求救] 蛋白質萃取 去除DNA

[chang0115 (OPPA)]

最近在萃取Taq DNA polymerase

表現用的菌株是rosetta

萃取方式為破菌>75度C 水浴 30分鐘>離心>取上清液>加storage buffer save

使用的破菌buffer是

Buffer A: 50mM Tris-HCl, pH 7.9, 50 mM dextrose, 1mM EDTA, 4 mg/ml lysozyme

Buffer B: 10 mM Tris-HCl, pH 7.9, 50mM KCl, 0.5% Tween-20, 0.5% NP-40

但是最終發現有DNA contamination，有試過用sonication方式

但PCR時還是有產物出現(在沒加template的情形)

現在想利用DNase於破菌完的步驟進去作用，EDTA會拿掉，改用PMSF

想請問在buffer A, B的環境下，DNase會作用的好嗎?

有查到DNase在高鹽度環境下活性會降低

是否有更好的辦法去除DNA呢?

感謝大家耐心閱讀與解答

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◆ From: 42.66.47.117
推 jason0919:去除EDTA後 請加5mM MgCl2, DNase I才會有效果
→ jason0919:稍微shaking 15min