[求救] RNA抽取問題

[ttgsh (寶)]

請問一下大家在RNA isopropanol沉澱的時候

離完心會發生pallet變一大片的情形嗎??

在eppendorf中不是形成塊狀的沉澱

而是分散的情況???

想請問可能是前面哪個步驟出錯了

流程

trizol 1ml 5min

200ul chloroform mix 靜置3 min

取上清液與isopropanol 1:1 mix

-20度C 1hr後離心 12000rpm 15min



--
※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) 
◆ From: 163.25.90.92
→ Ianthegood:po個圖來吧
推 Inzaghi0227:有時候你的細胞數太少,收到的RNA就更少,所以異丙醇
→ Inzaghi0227:離心完很可能看不到明顯的沉澱物,做法是直接用倒掉上
→ Inzaghi0227:清液的方式,慢慢倒,底下會有一小團透明狀,流動性較低
→ Inzaghi0227:那個就是RNA
→ puec2:其實快快倒也不會不見 慢慢倒還怕他會飄起來
推 CD133:你chloroform靜置完後有離心嗎?應該要12000rpm離心後，
→ CD133:取上清液，再加入isopropanol
→ ttgsh:有離心~ 但是完全沒看到透明狀，加了酒精後還有點黃黃的
→ ttgsh:http://www.flickr.com/photos/109994717@N03/11094933606/
→ ttgsh:補上照片 不過不知道清不清楚> <
推 CD133:我說的離心是在你加入chloroform之後喔，不是加isopropanol
→ CD133:因為照片上看到的是你加入isopropanol離心過後的樣子
→ CD133:你原文的步驟中在加入chloroform靜置3分鐘後就直接取上清液
→ CD133:如果你一切的步驟都正確，那就可能是你的細胞量太多。
→ CD133:最後建議你要帶手套拿管子，畢竟是做RNA的實驗，小心一點好
→ CD133:不過你的指甲套很可愛就是了....
→ hensu:真的要戴手套...不只是保護RNA也保護自己..不要沾到有機溶劑
→ ttgsh:步驟是我忘了寫上! 加完chloform後有離心~
→ ttgsh:細胞太多管壁會有這種現象嗎?? 但沉澱出的pallet很小耶~
→ ttgsh:只是為了拍照方便,在操作的時候還是都有戴手套的 XD
→ Ianthegood:isop後離30min看看
推 leoblack:操作RNA請全程戴手套+口罩~必要時請噴酒精
推 huuban:我也看過分散在管壁上，結果品質莫名其妙的好