[求救] 有關於非E.Coli系統的competent cell製備方法

[otota (武家傳奏)]

在下目前要進行E.Coli以外的菌種的competent cell的製備

目前要做的菌種有Bacillus sp., Pantoea sp.,以及Sphingomonas sp.

以便接下來進行transformation的步驟(heat shock的)

雖然已經嘗試使用一般E.Coli的勝任細胞製作法(CaCl2的方式)

並且以抗生素Amp進行篩選

但感覺transformation之後效率不高，或者是之後的plasmid DNA萃取上沒有目標物

著實困擾

於是想請問一下版上的大大們

對於E.Coli以外的菌種Competent Cell 製備是否有其他的方式可以進行

以及是否有其他要注意的地方或細節

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◆ From: 140.130.9.8
→ chl20020933:不會查paper?
→ otota:paper有查過了，但他那邊是用電穿孔，而不是heat shock
推 milkpa:就是因為不好送才不用化學法......
→ otota:嗯...目前是有操作過轉型前跟轉型後的塗盤(with Amp)，轉型
→ otota:前沒有colony出現，而轉型後的有出現，這樣算是成功嗎?還是
→ otota:這種為Psudo的情況？
→ chl20020933:g+細菌用化學法要先處理成protoplast不會比較好用
→ chl20020933:而且不是所有細菌都可以處理成有competence能力