[求救] qPCR檢體放於冰桶上太久是否會影響結果

[godinal (無心)]

最近又發生positive control無法順利產生signal的囧境

今天因為想省時間, 想和同事一起上機

當我把qPCR的reagent全部都加好後, 放在冰桶上(沒有插在冰裡)將近一個小時

同事的結果有出來...但我做的所有檢體皆無訊號

到底是我的reagent出了問題?? 還是Taq enzyme在室溫太久已經沒有活性了??

請問各位前輩有沒有這種經驗..

麻煩幫忙解惑一下

感恩

謝謝








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◆ From: 140.96.146.109
推 qiet:Taq能拿來跑PCR溫度上上下下一兩個小時都撐的過去了
→ qiet:只是放室溫一小時就算有影響也不至於會到沒有訊號
→ Ianthegood:還是sybr壞了
推 huangsw:那個廠牌的機器？ abi可以讀原始檔判斷狀況
→ godinal:重做了一次...PC還是沒出來...完全理不出頭緒...
→ godinal:難不成又是primer的問題??明明之前做72度就很順
→ godinal:annealing硬是被改到64度...這應該無關吧!!
→ roy047:Annealing溫度才是重點吧? 與primer Tm值密切相關
→ godinal:照前輩的說法..每次合成primer(一樣序列)..
→ godinal:annealing溫度都要重新捉...超怪的...
→ godinal:我拿的這批primer之前72度做都沒事
→ godinal:但前輩合成的新primer...72度做不出來..改成64度.就很怪
→ roy047:第一次聽到這種說法ORZ Tm影響最大的除了seq還有所用的
→ roy047:polymerase & buffer種類