[求救] MTT assay 細胞缺一塊

[derren (我想要ㄉ幸福M)]

跪求各位高手~

我們的實驗是做primary cortical cell種在24 well裡

最近做MTT都會發現細胞有缺塊現象,如圖所示

http://ppt.cc/HpiK

最下面3格很明顯都有缺一塊變成空白的樣子(control組!!!)

上面兩格應該是正常的MTT樣子(加了細胞毒性的藥物)

我有記得10倍稀釋原液加入

我本來覺得是Pipette力道太大,但是並不是每一格都有

而且也不是每一次有會有空白出現(但是機率很高) 70%以上吧

容易空白的幾乎分佈在四週 中間比較不容易缺塊

想請問各位大大是哪裡出了問題~~

感謝

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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) 
◆ From: 203.71.94.31
→ puec2:plate coating沒做好吧 之前也用到一批這種的 馬上換掉
→ puec2:永不採用y
→ puec2:應該說plate底部的表面處理沒有做好
→ blence:看起來只是操作的速度,那個空白像是你傾斜更換medium時乾掉
→ blence:的上面區域,你suction方向跟空白是不是相反? multi容易這樣
推 genius012:感覺很像是被沖掉，PBS wash 的時候
→ genius012:跟別人借一個不同牌子的plate 試試 就知道了
→ puec2:我們之前就遇過了 vero cell還長到缺一塊咧
→ storm780121:遇過  把MTT跟medium先混好再加入plate有改善
推 icome:如果出現在四周很有可能是乾掉 四周乾的快
→ satasumi:應該是PLATE的問題,之前也有看到過...一換批號就OKAY了