[求救] 詢問primer dimer相關問題

[godinal (無心)]

請問有人發生過同樣的PCR條件...原本不會出現primer dimer
但最近開始出現淡淡的primer dimer
前輩做的有時甚至會壓過原本我們想要P的product

雖然在我的觀察中...似乎當templete濃度太高時，或NTC時primer dimer比較容易形成

但回去看幾天前的結果...似乎都沒有primer dimer出現

也有重新配primer mixture...還是一樣有primer dimer

因為接下來要進入qPCR...所以想請問各位有沒有關的經驗

唯一能想到的也只有primer freeze thaw的差異...

有可能因為冷凍解凍太多次而產生primer dimer嗎??

PS:我們已選用hot start Taq polymerase enzyme...

而且PCR第一步就是94度7分鐘...照理primer dimer應該會解掉吧??

如果大家有任何經驗， 煩請告知改進方案

感恩

祝

新年快樂







--
※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) 
◆ From: 140.96.146.51
推 supray:換新的enzymer 條件就會變動 怎麼變參考user manual
→ supray:不一樣的buffer system  anneal溫度也不太一樣
推 supray:cycle數可以降低,primer濃度也可以降, enzyme 多個r =.=
→ supray:但你一次只能挑一個變因去動
→ godinal:比較奇怪的是我什麼條件都沒換primer dimer從無到有