[求救] 小鼠組織抽RNA都抽不到

[mars52013146 (瘋狂恰吉)]

我拿小鼠肌肉組織來抽RNA過程如下

將組織放置研缽(已放在冰上並用液態氮冰過)壓碎後加入trizol 1ml

研磨到trizol回復到液狀蒐集到離心管加入200uL chloroform 10min

離心(低溫) 15min取上清液

加入等量isopropanol後室溫作用30min

離心(低溫) 15min吸掉上清液

加入1ml 75%酒精(DEPEC 水配置) wash pellet(只有沖起來沒有打散)

離心(低溫)後放室溫15min dry

用DEPEC水回溶50uL

我的問題是

1.我測RNA濃度 280/260比值介在1.6~1.7而260/230卻只有0.5...

我詢問抽過RNA的學長他說260/230要在1.5以上才好

2.我的組織已經放在-80冰箱半年這樣會有影響嗎??

我抽了3.4次了沒一次成功....T^T


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◆ From: 120.107.58.150
→ roy047:260/230過低應該是吸到chloroform?
→ mars52013146:我抽RNA濃度只有50ng/uL左右,最多才117ng/uL
→ mars52013146:可是我沒有吸到最底還有殘留液體在分層那階段耶
→ Ianthegood:+CHLOROFORM後的離心不要在低溫做試試看
→ mars52013146:我加入chloroform是室溫作用10分鐘在低溫離心
推 HEK293:磨完我會給他一次forzen-thaw cycle才做後續extraction
→ mars52013146:喔~我看懂你的意思了,誤會誤會抱歉
→ mars52013146:h大的意思是再加入液態氮在冷凍一次在磨一次的意思
→ Ianthegood:加chloroform之後有沒有搖阿?
→ mars52013146:有,只有上下搖幾下沒有vortex
→ huuban:抽完再酒精沉澱一次？
推 rebirth:你的問題是抽不到RNA，還是抽得到但是純度差？
推 reinherd:建議google Qiagen Fibrous Tissue RNA extration kit
→ reinherd:肌肉這種fibrous tissue不容易取RNA
推 patrickkuan:肌肉ＲＮＡ少,建議提高組織量