[求救] LNCap一pass就死一半

[chenmick ()]

小弟最近開始接觸LNCap這個細胞株(購自食品所)

上網爬文又自己養了一陣子覺得還真的不好養@@

買來剛解完貼得超漂亮,但pass細胞後就長不好了

我已經知道這個細胞株容易飄,但不曉得為什麼每次pass細胞就死了3~4成

在顯微鏡底下觀察到許多疑似死細胞的黑色無光線折射殘骸

(也亮亮一坨坨飄在medium,但有人說是活細胞!?)

我試過以versene和trypsin處理細胞,結果都差不多

Medium配方(參考食品所):Sigma RPMI-1640 (Product No. R6504)(已含2mM L-glutamine),
NaHCO3 2g/L, HEPES 2.98g/L, D-Glucose 4.5g/L(有再外加補到final conc.),
Sodium pyruvate 1mM, 10% FBs, 1% P/S抗生素

請問這樣的medium可以嗎?

把LNCap打下來可以pipetting嗎?力道又是如何呢?

感謝!

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◆ From: 203.64.48.9
推 honey823:這個細胞真的比較容易飄起來, seeding後請讓它貼附生長
→ honey823:至少24小時之後再去做實驗會好一點, 貼附的話, Corning有
→ honey823:出一款cellbind的dish, 用來養這類型的細胞, 還不錯用
→ honey823:medium的話應該沒太大問題, 我也用一樣的配方 (其實配方
→ honey823:ATCC或者食科所都差不多), 我的medium是用Gibco liquid的
→ honey823:打下來的話, 我是用trypsin 3~5分鐘, 其實PBS沖也會下來
→ honey823:沒碰過死的這麼慘的問題, 要不要check一下CO2培養箱的
→ honey823:CO2濃度? 以前用過Thermo可以滅菌的培養箱, 曾經發現滅菌
推 honey823:後或者使用久了之後, CO2的濃度會跑掉, 以上為個人經驗.
感謝~ 我細胞pass完第二天才趕動它
細胞是用corning一般的dish(Standard Tissue Culture Treated)
請問coat poly lysine可以嗎?
thx~
※ 編輯: chenmick        來自: 203.64.48.9          (03/04 12:44)