推 huangsw:primer從以前就不穩嗎？還是最近才開始, 拿管新的分裝管 03/25 10:08
→ godinal:最近才開始做..而且每次都是拿新的分裝管 03/26 09:31
推 huangsw:有沒有考慮重新設計primer? 03/27 22:29
由於之前做qPCR其NTC都時有時無(我是用SYBR Green 系統)
上個星期配了一管12 reaction之 master mix(除了templete外其它都加)
分別放到不同的孔洞中
其中有七管NCT由qPCR看起來有amplify
跑agarose gel後發現其中有1管Ct=39在gel裡沒有band
還有一管Ct=25在agarose gel也看不到band
剩下5管NTC有訊號, 跑agarose gel後發現其NTC的band位置還不大一樣
今天又同時配了10 reaction 之master mix
qPCR結果中還是有一半(5管)看起來有amplify
不知大家有沒有碰過這種狀況
NTC很不穩定，同時配只是分裝都會有不一樣結果
已經清過實驗室，也換過實驗地點，也有改用filter tip
連pipettement都拿去滅菌處理
實在想不出還有什麼方法可以讓NTC穩定下來
不知大家有沒有什麼建議
麻煩大家幫忙想想有什麼辦法....感恩
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