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請問各位,這幾次壓片都沒有結果。 抗體是用Santa cruz的,都存放於4度C冰箱 都用PBST配1:1000,壓O/N 可是抗體是學姊留下來的,學姊大概一年前畢業吧 二抗也是用PBST配的,1:5000 每次去壓的結果都頗醜. p27和p21根本沒出現過...只有出現actin 而且actin也不在43這個位置上.... 想詢問一下各位怎麼解決...換抗體嗎還是要用脫脂牛奶去配抗體? 實驗室沒半個學長姐超級囧欸... -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc), 來自: 203.71.233.11 ※ 文章網址: http://www.ptt.cc/bbs/Biotech/M.1400118674.A.924.html
ai760721:一般不是都會用blocking去稀釋嗎? 05/15 11:55
xxtomnyxx:blocking 用什麼,抗體就用什麼去稀釋 05/15 13:26
jsi:看起來抗體配製沒甚麼問題。actin的圖和曝光時間可提供一下嗎? 05/15 17:56
jsi:說不定是protein量太少所導致。 05/15 17:57
jsi:直接問畢業學姐會比較快,若她壓的訊號都很好,比對你們之間 05/15 18:02
jsi:作法差異就知道啦! 05/15 18:03
iceking:連自己try條件都沒try過就上來問,也沒附圖,我們也很囧欸~ 05/16 00:21
ko363630:ECL效果不是頂多才半小時? o/n沒差吧 05/16 01:50
bear2926:http://ppt.cc/ichw 05/16 13:31
bear2926:這個是第一次有壓出來的actin 05/16 13:32
bear2926:http://ppt.cc/w3NJ 05/16 13:33
bear2926:這個是後來壓的,可是不在43那條位置上... 05/16 13:34
bear2926:可是p21和p27都壓不出來欸.... 05/16 13:35
bear2926:如果一抗用牛奶稀釋...這樣不是不好保存? 05/16 13:36
blence:看背景感覺訊號像是調過,如果是這樣p27跟p21看不到也合理 05/16 14:26
blence:而且你要看p21,p27,應該知道這兩個不見得在所有細胞都明顯 05/16 14:27
iceking:用牛奶稀釋放1~2個禮拜沒問題,1抗不要用PBST,用PBS milk 05/16 16:06
iceking:稀釋看看 05/16 16:06
bear2926:好,我今天試看看...因為我怕用牛奶稀釋不能一直reuse 05/19 11:10