[求救] 蛋白質純化(BL21)

[gto33456789 (太人生了)]

大家好

小弟我用BL21 pET24a insert一段12.1Kb的蛋白進去

在做小量50ml,測試條件pretest的時候, 蛋白超粗超厚

做完wertern也確定是his-tag

之後做大量養1L時候, 蛋白就產量不高, 越來越淡

是我的菌不純嗎...還是...

感謝...

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推 vetvet:shaker的轉速(或是要叫'扭力？')，也要跟著體積放大！
→ vetvet:否則空氣不夠，就會長不好~
推 ko363630:發酵的做法 跟小量的做法不一樣 當然會變低
→ rurucherry:轉度跟搖瓶大小都可能有關唷
推 abcm1042:菌夠多嗎? 養的菌是第一代還是挑菌再塗盤第N代
→ ninetoweregg:蛋白產量不高是指整體還是上清液的soluble不多??
→ jsi:破菌完全不完全也會影響，曾改用French press破菌，產量增加