[求救] Lentivirus titer 測定

[silverberry (平行線上的交集....)]

大家好，我是 lentivirus 的新手，
想請問版上操作 lentivirus infection 的版大們，
有無推薦的 kit 或是方法測定 lentivirus 的 titer?

在網路上查到很多家不同的 ELISA p24 antigen kit 和不用抽 RNA 可以快速做 qPCR
LTR region 的 kit。
或是用 GFP 類的 reporter 測定 transduction efficiency
也查到 paper 比較分別測定 DNA、RNA 和 protein 量來估計 titer 的方法 (ref. 1)
選擇太多了，不知道哪一個比較適合。
挑幾種買來試試看這種想法應該會直接被碾出實驗室 Orz

我是在化工系的實驗室，
實驗室之前的助理是用體積記錄感染的用量，
結果推算出了轉染率 <0.001% 的實驗記錄。
雖然我看了版上之前的討論文，了解 lentivirus packaging 和 vector size 成反比。
但是用體積來計算實在讓人很崩潰啊 @ @
和指導教授討論以後希望可以精確地用 MOI 之類的數量化方式來繼續這個實驗。
所以想知道大家平常都是怎麼數量化這個步驟的。

謝謝大家。

ref. 1
http://www.nature.com/gt/journal/v9/n17/full/3301731a.html

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我們用的 lentivirus vector 是 addgene 的
FUW-OSKM 和 pLOVE 系列，
用 psPAX2 + pMD2.G 在 HEK293FT cell 用 lipo2000 packaging.
Packaging 完收的 medium 用 Amicon 100kD 濃縮後，分裝保存在 -80.


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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc), 來自: 75.72.204.238
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※ 編輯: silverberry (75.72.204.238), 07/19/2014 15:41:33
→ shelix:SBI有QPCR KIT...可是夭壽貴
→ soom:lab之前是eGFP virus感染293t，推測該批病毒的活性
→ soom:不過這種做法當然耗時，也只敢相信10的幾次方這樣的scale
→ soom:好處是能知道"活病毒"的量，而不是死活都一起測
推 roy047:類似二樓 取少量virus感染少量cell看GFP，也有lab是跑qPCR
→ silverberry:感謝樓上，所以如果 vector 沒有 GFP 就要自己做一個
→ silverberry:來當 titer 測定的依據的意思?
→ silverberry:感謝大家的建議
推 liuse:你的vector有帶任何antibiotics嘛?
→ liuse:有的話  用96-well plate seed series cell density
→ liuse:橫向加四種不同的virus量，感染後加藥，讓沒infect的細胞死
→ liuse:亡，之後數每個well剩多少細胞，劃出curve就可以算出titer了
→ liuse:不過對不同種類的細胞會不一樣就是
→ roy047:如果原本沒GFP加了GFP表現量會不一樣 所以也不需要硬加
→ roy047:可以改用別的方法測 除非以後實驗全都換成有GFP的
推 heparinase:既然要用MOI, 我會用flow cytometry分析GFP細胞比例，
→ heparinase:換算titer
→ silverberry:謝謝大家的建議。比較完 Kit 和 ELISA 以後，發現
→ silverberry:價格都不太和藹可親。GFP 的部分要跟其他同學討論一下
→ silverberry:目前可能會先參考 paper 設計 LTR 的 primer 做
→ silverberry:minus strong-stop cDNA 的 qPCR。
→ silverberry:先用 viral genome 濃度做參考~