[求救] Gateway cloning

[silverberry (平行線上的交集....)]

大家好，
我之前做 cloning 都是用 restriction enzyme 剪接法，
但是因為這次的 target vector 只能用 gateway，
所以第一次使用這個方法。

在 invitrogen 的 manual 裡面建議，
pENTR vector 要用他們的 PureLink™ HiPure Plasmid Midiprep Kit 純化。
而且不建議使用 Mini-prep (alkaline lysis)。
但是我看了這套 HiPure 的 manual，
裡面也是 alkaline lysis，只是不是用 spin column 而已。


請問各位使用過 Gateway® LR Clonase II + Enzyme Mix 的版友，
我一定要換純化 vector 的 kit 嗎?


謝謝 m(_  _)m


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→ blence: 只是建議用他們自家產品而已,沒有說不適合用其他miniprep
→ blence: genemark, viogene的miniprep用過也都ok
→ turtle24: 就我的經驗用其他牌也可以做 gateway  影響應該不大
→ silverberry: 感謝樓上兩位~
→ silverberry: 另外請問，如果我的 insert 是 pENTR 的兩倍大，
→ silverberry: 我還是用他建議的 insert:vector = 0.5-2:1 嗎?
→ silverberry: 還是應該反過來?
→ blence: I:V=0.5~2:1，你把兩者反過來不是也是0.5~2:1?
→ Ianthegood: 是分子量不是重量喔
→ silverberry: 喔不好意思，我沒說清楚，我是手冊上寫 molar ratio
→ silverberry: b 大真是一語驚醒夢中人~
→ silverberry: 不過因為 pENTR 我都加 1 uL，所以是調整 i 的量
→ silverberry: 所以沒想清楚 @ @