[求救] MTT assay縮小濃度範圍存活率卻也變低了!

[grassshan (紙飛機啊歐歐踢欸死)]

最近實驗在做篩選用藥濃度的MTT assay
一開始拉大區間的測試 100/ 125/ 250/ 400/ 500/ 750/ 1000
因為之後要做分化，所以加藥培養三天後才做MTT，
結果出來是400 ug/ml的濃度以上都會死很誇張，存活率都不到一成

而中間的濃度像是250、125也會死個兩、三成（就存活率大概７成多一點），
但濃度100的則是存活率可達九成四！
跟老師討論過後是先試試看濃度100以下的存活率，


於是我就設定了100 / 50 / 25 / 12.5 / 6.25
但我這次跑了三四盤了，100ug/ml的濃度的組別...

存活率只有七成　囧！！！

要到12.5ug/ml的濃度才會達到近九成的存活

為什麼只是把濃度範圍縮小，存活率也降低了阿阿阿阿阿
ㄒ＿ㄒ

我使用序列對半稀釋的方式，先配置最大的所需濃度後，
再依序稀釋成需要的濃度。


為什麼結果出來會這樣Q_Q
我實驗的濃度到底要怎麼抓來使用阿阿阿 >_<




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推 sean0912: 既然已經算出存活率 應該是有跟Control比較 感覺是兩次
→ sean0912: control的情況不一樣 導致比值出來存活率有差
→ untilnow: 問題可能出在你配的方法 一開始100是由1000稀釋下來
→ untilnow: 稀釋後可能很偏離原先的100了
→ untilnow: 但第二次最高濃度就是100 所以直接反應100濃度的結果
→ untilnow: 當然也有可能因為配藥方的方便度, 1000的好配, 100的反
→ untilnow: 而因量太小而產生較大誤差....所以才會遠成第二次死很大
→ grassshan: S大～我有想過跟細胞狀況是不是有關係，但出來的結果
→ grassshan: …
→ grassshan: 應該不會差那麼多吧？！
→ grassshan: U大！我最大濃度第二次是配濃度200直接對半稀釋，在猶
→ grassshan: 豫是否直接1000再做1/10稀釋？！
→ grassshan: 但這樣濃度區間該怎麼判定呢…
→ untilnow: 1000做 1/10稀釋沒有必要吧  第一次實驗是幫助你縮小範
→ untilnow: 圍  你不如說說你的稀釋用量 用多少體積稀釋了多少
→ untilnow: 容不容易造成配置濃度上誤差