[求救] 24 well 怎麼將細胞分勻 ?

[dorisaq2791 (dorisaq2791)]

我有爬過一些文，但不甚了解，而且我的問題跟大家似乎不太一樣@ @

我的問題是將細胞分至24 well 時細胞並不會均勻分布
總是呈現中間較少  旁邊較多的情形


我的作法

將細胞懸浮夜和medium依所需比例混合均勻後放入50cc離心管  以Glass pipet mix均勻
分細胞時也是以GP分 ，每滴3 well 即再度mix
然後就直接送進培養箱了  沒有作其他搖晃
在細胞液體積部分 我是分得很平均的 每個well都很接近
在剛分完時有在顯微鏡下看過，感覺都細胞分佈很平均
不過當細胞貼好，一拿到顯微鏡下就破功了...  中間很稀少，在well邊緣較集中
實驗室學姐說有可能是在滴細胞液時的速度不對
想問大家有沒有什麼想法 ，因為我也不是每次都分的不平均@ @
想知道除了滴細胞夜速度方面是不是有其他問題


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※ 編輯: dorisaq2791 (118.171.191.42), 12/07/2014 02:31:19
→ blence: 前面怎麼mix都沒差,well會分佈不均跟加入well之前動作無關
→ blence: 加入之前mix只影響各well細胞數,之後的搖晃才影響分佈
→ vetvet: 加入的時候，先在well中間加少量，等每孔都加完了，再調整
→ vetvet: 每孔的medium量到所的量，再輕輕的敲一敲，讓細胞散開就好
→ raiyu: 最後每well的medium量大約是多少?
→ raiyu: 太少容易分布不均(不過比較容易是擠在中間或某區)
→ raiyu: 可以像樓上說的 先加部分medium在well中再加細胞液
→ raiyu: 最後500ul/well左右 再前後左右輕拍 應該就可以
→ dorisaq2791: 1
→ dorisaq2791: 抱歉我不太會用b版， 我的細胞液總體積是1ml
→ dorisaq2791: 謝謝大家  我會再試試看
推 chaunen:  直接滴入well 不要搖 hood裡放個10分鐘等細胞貼
→ chaunen: ex:1*10^5 cells in 500ul per well  10個well就配11份
→ chaunen: 在50ml tube pipette均勻後吸500ul 滴入well
→ chaunen: plate一搖到就GG了
→ chaunen: 另外要注意hood桌面的水平 不然會發現細胞密度呈現梯度
→ chaunen: well越大越明顯 尤其10cm
推 chaunen: 中間少旁邊多應該是medium太少 24well要400ul以上較保險
→ chaunen: 搖搖苦手經驗留
→ blence: 原po都說總體積1ml了,顯然不是medium太少
→ joe0725a: 我以前也遇過，你可以每次入well前先用tip mix均勻 我是
→ joe0725a: 總體積超過30mL 我會分兩館