[方法]請問WB的band要怎樣壓片讓他看起來比較圓?

[t123401221 (沉默玩具)]

請問各位先進
我要看大約38KDa的分子GAPDH
跑12.5% SDS-PAGE 電壓80 V
但transfer完膜染ponceau S都可以看到明顯的band
接著就是接抗體1抗1:1000 o/n 二抗1:12000 室溫1小時
但是手洗壓片,壓個五分鐘
壓出來的band都很弱而且band都扁扁的
而且band跟band之間都沒有間距看起來好像都連在一起

可以麻煩各位幫我解決這個問題嗎??
謝謝各位^^



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→ a90648: 貼個圖上來吧!! 這樣比較容易知道問題在哪
→ blence: 哪一家的GAPDH抗體要這樣做,如果常用的抗體,這條件早燒了
→ a90648: 其實以他的敘述來看應該是過強全黏在一起了
→ Bows: 我們家全新的GADPH只 hybrud 1小時就超亮了..
→ roy047: GAPDH一抗1:1000....
推 chaunen: 感覺是protein太多..
推 tynse71864: 1抗1：3000試試？