[方法] starvation

[NCKUM (成功大學醫學)]

我實驗是為了看knockdown這gene A是不是不會幫助protein B釋放出到medium

再利用ELISA測某個protein B

我之前有測過control和knockdown我的gene A

在starvation 24h下control測到我想看到的protein B比knockdown高

而在沒starvation也是

但是control比knockdwon在starvation非常明顯差異

而沒starvation下只差異一點點

請問我現在要做protein B的signal

我要比較 control 比knockdown 下游signal 和 在kncokdown組加回protein B

也就是 control & knockdown & knockdown+protein B

我實驗設計是 早上先種細胞 晚上starvation 隔天早上就直接加protein B不換medium

(因為換掉 他釋放出來的protein B就被我換掉 還是再換一次新的serum-free medium?)

24小時候直接收lysis

還是有更好的方法

感謝


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※ 編輯: NCKUM (140.116.191.120), 07/31/2016 00:32:49
※ 編輯: NCKUM (140.116.191.120), 07/31/2016 08:19:36
推 tynse71864: 我會直接加 換了會影響
→ tynse71864: 但你的 protein B 要加進去的體積是？
1ml 加8ul 在6-well
→ tynse71864: 還有 B加進去的時間； 短時間的話冰的/有點大體積的 B
→ tynse71864: 加進去會影響到其他的事情
抱歉 沒說清楚 因為我看到在starvation時候 control 比knockdown組的function assay

和一些function protein很明顯差異

在knockdwown這組 protein B 無法被釋放出來

而在ELISA測到或許是protein B影響function, knockdwon geneA 無法釋出protein B

所以就想在knockdown組加protein B 回來來對比knockdown alone組

想說在starvation環境下加回protein B (protein B加下去開始算24小時)

但是前天starvation時間在加protein B 不換medium 這樣算好像超過24小時(還是沒差?)

→ Ice9: 隔天早上 [prot-B] 和外加了 prot-B 之後理論上的 [prot-B]
→ Ice9: 會差很多嗎？
加protein B recombinant protein 一定會比自己釋放出來的還強
※ 編輯: NCKUM (140.116.191.120), 07/31/2016 19:58:28
→ blence: starvation目的是什麼?是除去血清或細胞週期或只是先前試
→ blence: 出的最佳實驗條件?
→ blence: 另外,你的knockdown是上述什麼starved時間點前後做?
→ blence: 以及不考慮加B那組,單純有無kd會starved後多久看function?
→ blence: 在不考慮上述問題時,我會在剛starved時就加protein B
→ blence: 因為starvation會造或kd後極大差異,想加B就是restore目的
→ blence: 這樣,也沒有加B前要不要更換medium的問題