※ 引述《whimmy (peace in mind)》之銘言：
: 問一下 你所謂的怪東西 是說SEQUENCE結果不能判讀 NNNN
: 還是 不是你想像中的敘列 BLAST結果怪??
: 可不說一下 你是怎麼作construct的
: 從pcr product purification之後用的大略東西和步驟
怪的地方是
sequence蠻pure的
用的primer是我們拿去夾insert的那兩對
分別從N & C讀回來....
N端的算乾淨的SEQ
但是一半是讀到vector
另一半blast出來說是e.coli??
C端的則是一團大混亂.....
總之跟我們預期的真的差超多.....
construct做法
pcr做完之後...enzyme digest-->gel ext(取預期size的fragment)
-->vector digest--->ligation-->transformation
蠻一般的做法
我現在能想到的是我們原本在夾insert的時候
somehow出了啥事...夾出來的根本不是我們要的
又好死不死接的進去
不過這也太巧了吧!!!
對了
順便問一下
Klenow可以去掉overhang的 TA fragment??
有做過嗎??我是看paper寫的....
--
※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 140.112.121.100