※ 引述《emily1124 (玩夠了也該收心了)》之銘言：
: ※ 引述《whimmy (peace in mind)》之銘言：
: : 我說的insert check 應該是你transform 後挑24-48個colony的少量菌
: : 豁到水裡再進行普通的pcr 確定insert size是你要的
: : 才把那些菌增幅(養多一點啦) 再抽plsmid
: colony pcr喔~沒做....
: 哦~不過你講的也不無可能....
: 但訴我抽小量之後有用enzyme check說...
你是說再用RE再切嗎 喔 這個我到是不知道 ^^
condition就是先在pcr tube裡load 10ul water
然後用tip尖端挑一下colony 挑完後伸進水裡攪一攪
若是想留種的話 可以另準備一個plate用攪完的tip(尖端會帶菌水)劃幾道
這樣以後若是還要可以再從留的種再增幅抽plasmid
那其他就像你做的condition囉
比方 bacteria +water 10
10* buffer 3
2.5mM dNTP 2.4
2uM primer F 3
2uM primer R 3
3d water 7.9
2U/ul Taq 0.7
total 30
: 恩恩....so....那colony pcr的condition怎麼抓?
: 就用夾insert的去做嗎??
: : 有的時候因為菌長的比較密 看起來只有一個菌落但跑PCR來卻會有一條以上的band
: : 我在想你的是不是這種
: : 然後呀你們那兒降的方法是很routine的做了嗎
: : 就是說你確定你們用的primer和plasmid不會有non-specific binding
: non-specific binding應該不會...
: 我有把primer seq跟vector還有template做align
: 沒有發現這種情形喔~~
我本來還以為這比較有可能的哩....> <
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