有關western blot結果之疑問.....

[anastasia326 (想有一個新開始)]

我同學做完western blot
壓片的結果卻是反白的(即是band是白的  backgroud是黑的)
這是哪裡有問題呢????

我們推測的懷疑點~~
1.transfer過頭(我們transfer 1小時)
2.blocking過頭(4度c  overnight)
3.抗體的問題

還有什麼情況會造成壓片結果會反白的????
麻煩大家集思廣益   幫忙解決囉~~
我同學都快哭了....U_U"

感激不盡........

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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) 
◆ From: 163.15.177.78
推 sGoat:壓IP板還是底片?...是IP板的話可能是機器沒設定好
→ sGoat:1.的話不會有band  2.3.也不可能
→ agene:有可能是抗體污染吧!所以亂認蛋白..推小羚羊的說法
推 anastasia326:壓片是用底片..而且抗體是全新的
→ anastasia326:而且她一共做了2次...1次band全反白..另1次
→ anastasia326:則有黑的band跟反白的band
推 sGoat:他有沒有check底片是正片還是負片...
推 goodman1:插個話，曉慧我要學測OD值啦 ><"
→ goodman1:還要借ammonium acetate ><"
推 imxxl:我猜因為訊號太強(蛋白量太多所致)試著縮短壓片時
→ annebest:我覺得是二抗太強..需要再稀釋...
推 anastasia326:to建毅..蔡小君正在為western苦惱..她說懶ꨠ
→ anastasia326:得教只要作PCR就能畢業的傢伙 = ="
→ anastasia326:to大家...感謝大家的熱情回應^^"  代替我同
→ anastasia326:同學說謝謝囉~~~
推 hipper:做PCR就能畢業  這麼爽......XD
推 goodman1:= =" 那我可以先借ammonium acetate自己try嗎
→ goodman1:= =" 爽個叼，閒的很空虛啊..
推 hipper:能畢業才是王道.......
→ goodman1:畢業後什麼鬼都不會，畢業的很空虛 ＠＠
推 sGoat:其實PCR是很深奧的...恩