※ 引述《goodman1 (撰寫國王的論文ing)》之銘言：
: 我是用2%的agarose跑ssDNA
: 有時候會很不幸的出現整條都是smear 囧rz
: 請問要怎麼避免掉smear的出現啊
: 問題是出在PCR的過程還是跑電泳的過程？（還是製膠的過程？）
: <(_ _)> 剛溫
先問一下...
這是正常一般PCR還是甲基化敏感PCR...
一般PCR的話問題可能在PCR primer不夠好...
怎樣算不夠好呢...
以程式的篩選方式來看...
1.primer self dimer
2.primer pair dimer
3.primer loop
這三樣東西多...
或是1.2.的△G太高會造成產物smear
(因為primer dimer會自己粘自己產生一堆垃圾)
排除以上因素的話...
就是primer Tm值沒有橋好...
兩個的Tm值要相近,最好差在5度以內...
你annealing的溫度最好比Tm值比較低的primer再低五度...
還有你是拿啥東西當template...
plasmid ? 還是cDNA ?
template的質也會影響產物...
以上...x
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