※ 引述《goodman1 (帥哥皮 好人骨)》之銘言：
: <囧
: 這次的問題是「在什麼樣的情況下會跑兩次PCR」？
: 原文出處：Clin Genet 2004 67:267-9
: 原文：For methylation analysis on GRB10,
: the genomic DNA was bisulfite modified as previously described
: and subjected to two rounds of PCR with primers described in Table 1.
: (中間略)
: After the second round of PCR,
: the PCR products were digested with MboI and subjected to PAGE.
: 我記得好像有一種PCR是叫做nested PCR還是nest PCR
詢問了有做過methylation analysis的同學解答
這是做nested PCR
因為bisulfite所使用的DNA量非常的少,還要進行一些純化的動作
如果只做一次PCR在gel上是看不出來的,
所以經由nested PCR產生大量的product來進行接下來的實驗,ex:定序
nested PCR:
1.先用第一對primer進行PCR
→
==========================================================
←
預定檢視的片段
第一次PCR所得產物直接以第二對primer進行第二次PCR
→
==============================================
←
經由兩次PCR放大的結果,其DNA量才足夠進行其他實驗
現在做methylation的人,通常會使用nested PCR了
因為真的沒做就看不到啦~~~~~
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