推 hipper:建毅記得送一桶肯德基炸雞 到陽明生藥去犒賞逸婷...^^ 04/07 21:39
推 goodman1:XD 04/08 07:36
※ 引述《yitingg (婷)》之銘言：
: ※ 引述《goodman1 (帥哥皮 好人骨)》之銘言：
: : <囧
: : 這次的問題是「在什麼樣的情況下會跑兩次PCR」？
: : 原文出處：Clin Genet 2004 67:267-9
: : 原文：For methylation analysis on GRB10,
: : the genomic DNA was bisulfite modified as previously described
: : and subjected to two rounds of PCR with primers described in Table 1.
: : (中間略)
: : After the second round of PCR,
: : the PCR products were digested with MboI and subjected to PAGE.
: : 我記得好像有一種PCR是叫做nested PCR還是nest PCR
: 詢問了有做過methylation analysis的同學解答
: 這是做nested PCR
: 因為bisulfite所使用的DNA量非常的少,還要進行一些純化的動作
: 如果只做一次PCR在gel上是看不出來的,
: 所以經由nested PCR產生大量的product來進行接下來的實驗,ex:定序
: nested PCR:
: 1.先用第一對primer進行PCR
: →
: ==========================================================
: ←
: 預定檢視的片段
: 第一次PCR所得產物直接以第二對primer進行第二次PCR
: →
: ==============================================
: ←
: 經由兩次PCR放大的結果,其DNA量才足夠進行其他實驗
: 現在做methylation的人,通常會使用nested PCR了
: 因為真的沒做就看不到啦~~~~~
嗯嗯，謝謝 T＿T 真是詳盡的圖解，太感動了
1.所以nested PCR是放兩組primer下去一起跑喔？（我以為是兩組分兩次跑說＠＠）
2.我之前也有做bisulfite modify，不過後面有用DNA purification的kit去純化DNA
然後只有跑一次PCR，band是蠻清楚的
不過我跑的基因跟這篇PAPER的作者不一樣，我只是好奇他會什麼要做兩次PCR ＠＠
那是不是可以推論
「只要有經過純化DNA的步驟，就可以跑一次PCR就好
如果沒有純化DNA，就要跑兩次PCR(nested PCR)」 <---是這樣嗎？可以做這樣的推論嗎？
謝謝 <(_ _)>
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來吧! 不要阿阿阿阿阿~~~~
<囧> 囧/
負 正￣
∕╲ \\
負心漢才能吸引正妹 國小自然課本就有說了，正負相吸。
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